Control de la calidad y ensayos de rendimiento de CromoCen® SALM según la norma ISO 11133:2014/Amd. 1: 2018 / Quality control and performance testing of CromoCen® SALM according to ISO 11133: 2014 / Amd.1: 2018

Introducción: En Cuba, se desarrolló un medio de cultivo cromogénico y fluorogénico, para la detección, aislamiento y diferenciación de Salmonella de otras bacterias Gram negativas. El método que emplea el medio fue validado y su uso se adoptó en una norma cubana. El aseguramiento de la calidad y el control del rendimiento de los medios garantizan la confiabilidad de los resultados analíticos. La norma ISO 11133 establece criterios mínimos y métodos para evaluarlos. Objetivo: Evaluar los criterios de control de la calidad y de rendimiento de CromoCen® SALM, establecidos en la ISO 11133:2014/Amd.1:2018, para demostrar su fiabilidad para el análisis microbiológico de los alimentos de consumo humano. Métodos: Se evaluaron los indicadores de calidad físico-químicos de tres lotes y se definió un conjunto de ellos que caracteriza la calidad del medio antes y después de terminado, así como la consistencia entre lotes. Para el ensayo de rendimiento se seleccionaron 10 cepas de diferentes géneros. Se determinó la relación de productividad, el factor de selectividad y la electividad de CromoCen® SALM, según la ISO 11133. Resultados: La evaluación físico-química mostró una consistencia entre lotes en color, homogeneidad, apariencia del polvo y del medio preparado. Los valores de contenido de humedad y pH se encontraron dentro de los valores establecidos para este producto. La relación de productividad de CromoCen® SALM con respecto al agar triptona soya, fue superior al 50 por ciento, mientras que el factor de selectividad resultó de 4. Se demostró que en el medio de cultivo se puede diferenciar un grupo representativo de géneros microbianos de Salmonella. Conclusiones: CromoCen® SALM cumple con los requisitos de calidad establecidos para este tipo de productos, según la ISO 11133 vigente. La correcta formulación de los lotes, así como el cumplimiento de los requisitos de calidad aseguran el funcionamiento adecuado para lo que fue diseñado(AU)

Introduction: In Cuba, a new chromogenic and fluorogenic culture medium was developed for the detection, isolation and differentiation of Salmonella from other Gram negative bacteria. The method and medium were validated and their use was adopted as a Cuban standard. Quality assurance and control of media is essential and mandatory to ensure the reliability of the results of the analysis in which they are used. ISO 11133 establishes minimum criteria and methods to evaluate them. Objective: To evaluate the quality and performance criteria of CromoCen® SALM, as recommended in ISO 11133:2014/Amd.1:2018 to demonstrate its reliability for the microbiological analysis of food for human consumption. Methods: The physical-chemical quality indicators of three batches were evaluated and a group of them was defined to characterize its quality before and after finishing, as well to evaluate the consistency between batches. For the performance test, 12 strains of different genera were selected. The productivity ratio, the selectivity factor and the electivity of CromoCen® SALM were determined. Results: The physico-chemical evaluation showed a consistency between batches in color, homogeneity, appearance of the powder and of the prepared medium. The moisture content and pH values ranged within the established values for this product. The productivity ratio of CromoCen® SALM with respect to tryptone soy agar was greater than 50 percent, while the selectivity factor was 4. It was shown that in the culture medium a representative group of Salmonella microbial genera can be differentiated. Conclusions: CromoCen® SALM meets the quality requirements established for this type of products, according to the current ISO 11133 standard. The correct formulation of the batches, as well as the fulfillment of the quality requirements ensure the proper functionality and match the design purpose(AU)

El dilema en los laboratorios de Koch, ¿Cultivar o no Cultivar? / The Dilemma in Koch's Laboratories, To Cultivate or Not to Cultivate?

La nueva norma técnica para el control y la eliminación de la tuberculosis es un gran avance para el diagnóstico de este microorganismo en Chile. Actualmente la principal técnica microbiológica para el diagnóstico de laboratorio es la biología molecular, que reduce el tiempo del resultado a tan solo un par de horas. La normativa actual indica que en el paciente caso presuntivo de tuberculosis (CPT) la técnica exclusiva a realizar es Biología molecular. La literatura indica que la detección a través de amplificación de material genético de la micobacteria tiene un límite de detección de 15,6 UFC/ ml, por tanto, todas las muestras bajo ese límite umbral potencialmente podrían no ser diagnosticadas bajo esta estructura emanada por el ministerio de Salud en Chile. Nuestra recomendación es continuar con el estudio de cultivo en medios líquidos o sólidos para todas las muestras hasta obtener literatura que avale lo contrario

The new technical standard for the control and elimination of tuberculosis in Chile is a great advance for the diagnosis of this microorganism. Currently the main microbiological technique for laboratory diagnosis is PCR, which reduces the time to result to just a couple of hours. The current regulations indicate that in the patient with a presumptive case of tuberculosis (CPT) t he exclusive technique to be performed is PCR. The literature indicates that the detection through amplification of genetic material of the mycobacterium has a detection limit of 15.6 CFU/ml, therefore, all samples under this threshold limit could potentially not be diagnosed under this structure emanated by the Ministry of Health in Chile. Our recommendation is to continue with the study of culture in liquid or solid media for all samples until literature confirms otherwise

Efecto de la ausencia de suero fetal bovino sobre la morfología y organelas de células fibroblásticas / Effect of the absence of fetal bovine serum on the morphology and organelles of fibroblast cells

RESUMEN Los fibroblastos son células constituyentes de los tejidos conectivo. Los fibroblastos gingivales (FGs), células responsables de la síntesis de la matriz extracelular (MEC) en el tejido conectivo gingival, participan en la regulación de los procesos de cicatrización y de reparación de la encía. Debido a su potencial regenerativo, los FGs podrían ser células capaces de contribuir a mejorar los procesos de cicatrización, a nivel local y sistémico e, incluso, ser utilizadas como un modelo celular útil en la comprensión de los aspectos fisiopatológicos de la cavidad oral. El objetivo del presente trabajo fue describir el impacto de la concentración del suero fetal bovino (SFB), en la supervivencia, el crecimiento y la expresión de marcadores celulares en los FGs. Cultivos celulares de FGs fueron realizados durante 7 días, utilizando medio de cultivo DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's médium), en ausencia y presencia de 10% de SFB. Análisis morfológicos e inmunohistoquímicos de la actina, mitocondrias, lisosomas y retículo endoplasmático (RE) fueron usados para evaluar el impacto de la concentración del SFB sobre los FGs. Los resultados indican que los FGs cultivados en presencia de 10% de SFB tuvieron una tasa de crecimiento más elevada en comparación con los FGs, cultivados en ausencia de SFB. El marcaje de los elementos celulares indica la ausencia de alteraciones en las organelas celulares de los FGs, cuando son cultivados en ausencia de SFB. En conclusión, los FGs son capaces de sobrevivir, proliferar y conservar sus características morfológicas, cuando son cultivados en presencia y ausencia de SFB.

ABSTRACT Fibroblasts are constituent cells of connective tissues. Gingival fibroblasts (GFs), cells responsible for the synthesis of the extracellular matrix (ECM) in the gingival connective tissue, participate in the regulation of healing and repair processes of the gingiva. Due to their regenerative potential, GFs could be cells capable of contributing to improve the healing processes at the local and systemic level and even be used as a useful cellular model in understanding of the physiopathological aspects of the oral cavity. The aim of the present work was to describe the impact of the concentration of fetal bovine serum (FBS) on the survival, growth and expression of cell markers in GFs. Cell cultures of GFs were performed for 7 days using DMEM culture medium (Dulbecco's Modified Eagle's medium) in the absence and presence of 10% FBS. Morphological and immunohistochemistry analyzes of actin, mitochondria, lysosomes and endoplasmic reticulum (ER) were used to evaluate the impact of FBS concentration on GFs. The results indicate that GFs cultured in the presence of 10% FBS had a higher growth rate compared to GFs cultured in the absence of FBS. The marking of the cellular elements indicates the absence of alterations in the cellular organelles of the GFs when they are cultured in the absence of FBS. In conclusion, GFs are capable to surviving, proliferating and conserving their morphological characteristics when they are cultured in the presence and absence of FBS.

Estudio de consistencia de un cultivo en zaranda de Streptococcus pneumoniae 19A a escala de 40 L / Study of the consistency of a culture on of Streptococcus pneumoniae 19A on rotational shaker at a scale of 40 L

Streptococcus pneumoniae es un patógeno oportunista que puede causar infecciones como otitis media, neumonía, sepsis y meningitis. Sin embargo, existen muchas limitaciones para el cultivo en zaranda de este microorganismo en los laboratorios de microbiología. Por esta razón, se realizó un estudio de la consistencia del cultivo en zaranda de Streptoccoccus pneumoniae 19A a escala de 40 L. Para esto se desarrolló previamente la curva de crecimiento patrón hasta las 5 h. Desde el pre-inóculo se inocularon 6 frascos de 100 mL, de los cuales se realizó la inoculación en botellones de 1 L y 5 L. En todos los casos, se determinó la pureza a partir de la tinción de Gram y el crecimiento bacteriano se monitoreó por el método de conteo de viables y la densidad óptica cada 1 h. Además, se evaluó el rendimiento del cultivo a partir de la cantidad de biomasa obtenida por peso húmedo. Cada proceso se llevó a cabo en condiciones iguales por triplicado. En los tres procesos se obtuvieron curvas de crecimiento similares, tanto por densidad óptica como por conteo de viables, alcanzando una viabilidad máxima de 109 UFC/mL en la última escala. Además, se obtuvieron rendimientos de biomasa de 11,62; 11,92 y 11,60 g/L, respectivamente. Estos resultados demuestran que la metodología utilizada ofrece una consistencia de este proceso, a pesar del alto volumen de cultivo en zaranda, lo cual no afectó la calidad de la biomasa, demostrado por la viabilidad final(AU)

Streptococcus pneumoniae is an opportunistic pathogen that can cause infections including otitis media, pneumonia, sepsis and meningitis. However, there are many limitations for the cultivation in shaker of this microorganism in microbiology laboratories. For this reason, a study of the consistency of the culture in shaker of Streptoccoccus pneumoniae 19A was carried out at a scale of 40 L. The pattern growth curve was made until 5 h, under our laboratory conditions and culture medium. From the pre-inoculum 6 bottles of 100 mL were inoculated, from which the scaling was accomplished to bottles of 1 L and 5 L. In all cases the purity was determined by Gram staining and the bacterial growth by viable counting method and the optical density were monitored every 1 h. In addition, the yield was evaluated from the determination of the amount of biomass obtained by wet weight. Each process has been made in equal conditions in triplicate. In the three processes, similar growth curves were obtained both by optical density and by viable counts, reaching a maximum viability of 109 CFU/mL on the last scale. In addition, biomass yields of 11.62, 11.92 and 11.60 g/L were obtained, respectively. These results demonstrate that the methodology used offers a high process consistency, despite the high volume of culture in rotational shaker, and did not affect the quality of the biomass, which could be demonstrated by the viable count(AU)

Caracterización de agentes bacterianos aislados en brotes de enfermedades transmitidas por alimentos / Characterization of bacterial agents isolated in diseases outbreaks transmitted by foods

Introducción: Las enfermedades transmitidas por alimentos se producen por ingestión de un alimento, incluido el agua, que puede estar contaminado por diversos agentes. Objetivo: Caracterizar los agentes bacterianos aislados en brotes de enfermedades transmitidas por alimentos. Métodos: Se realizó un estudio observacional, descriptivo y transversal de 100,0 % de los brotes de enfermedades transmitidas por alimentos en la provincia de Santiago de Cuba, desde enero de 2018 hasta diciembre de 2019, para lo cual se seleccionaron muestras de alimentos y heces fecales. La caracterización de las bacterias aisladas se basó en los resultados del crecimiento y otras pruebas bioquímicas-metabólicas. Se utilizaron resultados del aislamiento y confirmación de los agentes identificados en cada uno de los brotes a partir de las muestras antes citadas. Entre las variables analizadas figuraron: número de brotes, muestras de alimentos, de heces fecales y resultados de pruebas bioquímicas y metabólicas. Resultados: Se obtuvo un aislamiento de agentes bacterianos en 100,0 % de las muestras de alimentos. Hubo una mayor frecuencia de bacterias Gram negativas (82,0 %) y la menor correspondió a microorganismos Gram positivos (18,0 %). La Salmonella D fue el microorganismo más frecuente. Conclusiones: Este resultado representa un instrumento para el diagnóstico etiológico de los brotes de enfermedades transmitidas por alimentos en Santiago de Cuba.

Introduction: Diseases transmitted by foods are produced due to ingestion of a food, including water that can be contaminated by diverse agents. Objective: To characterize the bacterial agents isolated in diseases outbreaks transmitted by foods. Methods: An observational, descriptive and cross-sectional study of 100.0 % of the diseases outbreaks transmitted by foods in Santiago de Cuba, from January, 2018 to December, 2019 was carried out, for which samples of foods and stools were selected. The characterization of the isolated bacterias was based on the results of growth and other biochemical-metabolic tests. Results of the isolation and confirmation of agents identified in each one of the outbreaks from the samples mentioned above were used. Among the analyzed variables we can mention: number of outbreaks, samples of foods, samples of stools and results of biochemical and metabolic tests. Results: An isolation of bacterial agents was obtained in 100.0 % of foods samples. There was a higher frequency of Gram negative bacterias (82.0 %) and the lower corresponded to Gram positive microorganisms (18.0 %). Salmonella D was the most frequent microorganism. Conclusions: This result represents an instrument for the etiological diagnosis of diseases outbreaks transmitted by foods in Santiago de Cuba.

In vitro efficacy of five pediatric toothpastes in the inhibition of streptococcus mutans ATCC 25175 / Eficacia in vitro de cinco pastas dentales pediátricas en la inhibición de streptococcus mutans ATCC 25175

The present in vitro study compared the inhibitory action of five pediatric toothpastes against Streptococcus mutans ATCC 25175. Materials and Methods: Cross-sectional, comparative and experimental study. The microorganism Streptococcus mutans ATCC 25175 was inoculated onto solid culture medium of Müeller-Hinton supplemented with blood, then the plates were inoculated with five pediatric toothpastes: Oral B Stages, Colgate Smiles, Aquafresh My Little Teeth, Dentito and Denture Kids. Samples were incubated at 37°C for 48 hours. Subsequently the inhibition halos were measured; the experiment was repeated 20 times for each sample. Statistical analysis was performed with ANOVA complemented with Tukey's test. Results: Oral B Stages yielded a mean inhibitory halo of 23.2mm, Colgate Smiles an average of 21.7mm, Aquafresh My Little Teeth of 13.6mm, Dentito of 18.5mm, and Denture Kids a mean of 23.0mm. When performing the ANOVA test, it was found that there was a significant difference in the inhibitory action of pediatric toothpastes (p<0.005) and when using Tukey's multiple comparison test, Oral B and Denture Kids presented similar inhibitory action. Conclusion: All toothpastes presented inhibitory action against Streptococcus mutans ATCC 25175. A significant difference between their effectiveness was observed. Oral B Stages showed the greatest degree of inhibition.

El presente estudio in vitrocomparo la eficacia inhibitoria de cinco pastas dentales pediátricas frente a la bacteria Streptococcus mutansATCC25175. Material y Métodos: El estudio fue transversal, comparativo y experimental. Se inoculó Streptococcus mutansATCC 25175 en un medio de cultivo Müeller-Hinton complementado con sangre, luego a las placas cultivadas se le inocularon cincopastas dentales pediátricas: Oral B Stages, Colgate Smiles, Aquafresh My LittleTeeth, Dentito y Denture Kids. Se incubó a 37ºC por 48 horas y posteriormente semidió los halos de inhibición, se replicó el experimento 20 veces para cada uno. El análisis estadístico se realizó con el test de ANVA complementado con el test de Tukey. Resultado: Oral B Stages generó una media inhibitoria de 23,2mm, ColgateSmiles una media de 21,7mm, Aquafresh My Little Teeh de 13,6mm, Dentitode 18,5mm y finalmente Denture Kids una media de 23,0mm. Al realizar laprueba ANOVA se encontró que hay diferencia significativa en la acción inhibitoriade las pastas dentales pediátricas (p<0.005) y al emplear la prueba Tukey (comparación de múltiples) la pasta Oral B y Denture Kids presentaron acción inhibidora similar. Conclusión:Todas las pastas presentaron acción inhibitoria sobre Streptococcus mutansATCC 25175 existiendo diferencia significativa entre la efectividad de estas, con la pasta Oral B Stages demuestrando mayor acción inhibitoria.

Caracterización fenotípica y molecular, e influencia de medios de cultivo, en el crecimiento y emisión de luz de bacterias del litoral de La Habana, Cuba

Introducción: El complejo enzimático emisor de luz de las bacterias luminiscentes es una poderosa herramienta bioquímica, con una amplia variedad de aplicaciones, incluyendo el control de la calidad ambiental. Objetivos: Identificar taxonómicamente dos bacterias luminiscentes de las aguas de la plataforma cubana, así como seleccionar los medios de cultivo que favorezcan su crecimiento y luminiscencia. Métodos: La identificación taxonómica de las bacterias luminiscentes se llevó a cabo utilizando métodos tradicionales y moleculares. Cuatro medios de cultivo (LM, Boss, Chalk, ZoBell) fueron evaluados en función de la tasa de crecimiento específico (μ) y la luminiscencia utilizando un espectrofotómetro Genesys 10UV y un espectro fluorómetro Shimadzu RF-5301pc, respectivamente. Resultados: La caracterización bioquímica y fisiológica de los aislamientos de CBM-976 y CBM-992 mostró similitudes con las especies de Vibrio harveyi. El análisis del posicionamiento taxonómico confirmó una alta correspondencia con las cepas de V. harveyi aisladas de entornos acuáticos, utilizando secuencias parciales de los genes 16S rRNA, gyrB y pyrH. Se seleccionaron los medios de cultivo LM y ZoBell por tener una alta tasa de crecimiento específico de las cepas CBM-976 y CBM-992; así como por mostrar altos valores de luminiscencia. Los resultados permitirán profundizar en la caracterización fisiológica y son el punto de partida para el desarrollo de métodos de detección de contaminantes. Conclusiones: La combinación de las características fisiológicas y bioquímicas, así como las técnicas de biología molecular contribuyeron a determinar la posición taxonómica de las cepas CBM-976 y CBM-992 aisladas de las aguas marinas cubanas como Vibrio harveyi. Además, se seleccionaron los medios de cultivo LM y ZoBell como los más adecuados para el crecimiento y la emisión de luminiscencia de ambas cepas.

Introduction: The light-emitting enzyme complex of luminescent bacteria is a powerful biochemical tool, with a wide variety of applications including environmental quality monitoring. Objectives: To identify taxonomically two luminescent bacteria from Cuban shelf waters, as well as select the culture media that favor their growth and luminescence. Methods: The taxonomic location of the luminescent bacteria was carried out using traditional and molecular methods. Four culture media (LM, Boss, Chalk, ZoBell) were evaluated as a function of specific growth rate (μ) and luminescence, using a Genesys 10UV spectrophotometer and a Shimadzu RF-5301pc spectrofluorometer, respectively. Results: Biochemical and physiological characterization of CBM-976 and CBM-992 isolates showed similarities with Vibrio harveyi species. Phylogenetic positioning analysis confirmed a high correspondence with V. harveyi strains isolated from aquatic environments, using partial sequences of 16S rRNA, gyrB and pyrH genes. LM and ZoBell culture media were selected for having a high specific growth rate of CBM-976 and CBM-992 strains, as well as for showing high luminescence values. The results will allow deepening the physiological characterization and are the starting point for the development of contaminant detection methods. Conclusions: The rational combination of physiological and biochemical characteristics, as well as the molecular approach, contributed to determine the taxonomic position of CBM-976 and CBM-992 strains isolated from Cuban marine waters as Vibrio harveyi. Furthermore, LM and ZoBell culture media were selected as the most suitable for growth and luminescence emission for both strains.

Efectos del medio de cultivo y de la metodología aplicada sobre la formación de biopelículas de 2 cepas de Escherichia coli diarreagénicas / Effects of the culture medium and the methodology applied on the biofilm formation of 2 diarrheagenic Escherichia coli strains

La capacidad de formar biopelículas de los microorganismos patógenos en gran variedad de ambientes, superficies y condiciones trae consigo un importante riesgo, tanto para la industria alimentaria como para la salud pública. Este trabajo tuvo como objetivo evaluar y comparar los efectos de la metodología empleada y de los medios de cultivo utilizados, sobre la capacidad de una cepa de Escherichia coli verotoxigénica no O157 y una enteropatogénica de formar biopelículas sobre una superficie de poliestireno. Se ensayaron 2 variantes metodológicas en cultivo estático y se utilizaron medios de cultivo con diferente composición. Los resultados mostraron que ambas cepas formaron una mayor cantidad de biopelícula en cultivo en LB suplementado con glucosa, con recambio del medio a las 24 h y la cuantificación de la biopelícula realizada a las 48 h de incubación. Dichas condiciones podrían ser utilizadas en futuros estudios sobre formación de biopelícula.

The ability to form biofilms of pathogenic microorganisms in a wide variety of environments, surfaces and conditions constitute an important risk, both for the food industry and for public health. The aim of this work was to evaluate and to compare the effects of the methodology applied and the culture medium used on the ability of a non-O157 verotoxigenic Escherichia coli strain and an enteropathogenic strain to form biofilm on polystyrene surface. Two methodological variants were tested in static culture and culture mediums with different composition were used. The results showed that both strains were able to form a greater biofilm under culture in LB supplemented with glucose, with medium replacement at 24 h and the quantification of the biofilm carried out at 48 h of incubation. These conditions could be used in future studies on biofilm formation.

Impacto de la concentración de suero fetal bovino sobre las células epiteliales dentales / Impacto da concentração de soro bovino fetal nas células epiteliais dentárias / Impact of bovine fetal serum concentration on dental epithelial cells

Resumen El esmalte dental, tejido más duro del cuerpo humano, es formado por medio de la diferenciación de células epiteliales conocidas como ameloblastos. Recientemente, las células epiteliales dentales de incisivo de rata han sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante la formación del esmalte dental. Sin embargo, en función de los eventos estudiados es meritorio comprender su comportamiento, particularmente cuando la concentración del Suero Fetal Bovino (SFB) varia. El propósito de este trabajo es evaluar el impacto de la concentración del SFB sobre el crecimiento, proliferación y supervivencia de las células epiteliales dentales. Células epiteliales dentales fueron cultivadas en DMEM/F12, en presencia y ausencia de SFB. Observaciones morfológicas e inmunohistoquímicos de la actina, vimentina y fibronectina fueron realizados. Los resultados permitieron constatar que la ausencia de SFB afectó negativamente la proliferación de las células epiteliales dentales, pero mantuvo una expresión óptima de la actina y vimentina. Se identificó una alteración en la expresión de la fibronectina en las células tratadas en ausencia de SFB. En conclusión, la carencia de SFB disminuyo drásticamente la supervivencia, proliferación y expresión de la fibronectina en las células epiteliales dentales de rata.

Abstract Dental enamel, the hardest tissue in the human body is formed by the differentiation of epithelial cells known as ameloblasts. Recently rat incisor dental epithelial cells have been used as a cellular model of pathophysiological events during tooth enamel formation. However depending on the events studied, it is necessary to understand the behavior of these cells, particularly when the concentration of Bovine Fetal Serum (FBS) varies. The purpose of this work is to evaluate the impact of FBS concentration on the growth, proliferation, and survival of dental epithelial cells. Dental epithelial cells were cultured in DMEM/F12 culture medium in the absence and presence of 10% FBS. Morphological and immunohistochemical observations of actin, vimentin, and fibronectin were performed. The results confirm that the absence of FBS negatively affected the proliferation of dental epithelial cells but maintained an optimal expression of actin and vimentin. An alteration in the expression of fibronectin in the cells treated in the absence of FBS was identified. In conclusion, the lack of FBS dramatically decreased the survival, proliferation, and expression of fibronectin in rat dental epithelial cells.

RESUMO O esmalte dentário, o tecido mais duro do corpo humano, é formado pela diferenciação de células epiteliais conhecidas como ameloblastos. Recentemente, células epiteliais dentárias de incisivo de rato têm sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante a formação do esmalte dentário. No entanto, dependendo dos eventos estudados, é meritório entender seu comportamento, particularmente quando a concentração de soro fetal bovino (FBS) varia. O objetivo deste trabalho é avaliar o impacto da concentração de SFB no crescimento, proliferação e sobrevivência de células epiteliais dentárias. Células epiteliais dentárias foram cultivadas em DMEM / F12, na presença e ausência de SFB. Observações morfológicas e imunohistoquímicas de actina, vimentina e fibronectina foram realizadas. Os resultados permitiram confirmar que a ausência de SFB afetou negativamente a proliferação de células epiteliais dentárias, mas manteve uma ótima expressão de actina e vimentina. Uma alteração na expressão de fibronectina nas células tratadas na ausência de SFB foi identificada. Em conclusão, a falta de SFB diminuiu drasticamente a sobrevivência, proliferação e expressão de fibronectina em células epiteliais dentárias de ratos

Efecto de una combinación de nutrientes e inhibidores del crecimiento bacteriano sobre el desarrollo de Salmonella / Effect of a combination of nutrients and inhibitors of bacterial growth on the development of Salmonella

La selección de bases nutritivas para los medios de cultivo está relacionada con el microorganismo objeto de estudio y el propósito del medio. Los inhibidores del crecimiento bacteriano en los medios selectivos y diferenciales pueden interferir en el desarrollo del microorganismo de interés. Por ello se requiere un balance entre sustancias promotoras e inhibidoras del crecimiento bacteriano, sobre todo en bacterias que pueden encontrarse a muy bajas concentraciones o sometidas a diferentes condiciones de estrés durante el almacenamiento de las muestras que las contiene, como Salmonella. El objetivo consistió en evaluar el efecto de una combinación de nutrientes de diferentes orígenes y de inhibidores del crecimiento de bacterias grampositivas sobre el desarrollo de Salmonella. Se seleccionaron 52 cepas: incluyendo Salmonella, otras bacterias y levaduras. Se determinó la capacidad nutricional de mezclas de bases nutritivas registrando el incremento de la biomasa mediante técnica espectrofotométrica. Se comprobó la capacidad de recuperación e inhibición de dos variantes experimentales con diferentes inhibidores mediante la determinación de parámetros cuantitativos, y se comparó la productividad de la formulación final con un medio cromogénico. Salmonella mostró un crecimiento abundante en las variantes con diferentes combinaciones nutricionales, se logró la inhibición de un grupo de microorganismos y la productividad de la composición final fue superior a 0.80. La mezcla de bases nutritivas de diferentes orígenes y las sales biliares como inhibidor de crecimiento de bacterias grampositivas resulta una combinación eficaz para promover el crecimiento de Salmonella cuando estas bacterias se encuentran en baja concentración.

The selection of nutrient bases depends on the microorganism and the purpose of the medium. Inhibitors of bacterial growth are of great importance in selective and differential media and may interfere in the growth of the microorganism of interest. An adequate balance between promoter substances and inhibitors of bacterial growth is thus required, especially for bacteria that could be found either at very low concentrations or those subject to different stress conditions during storage of the samples containing them, such as Salmonella. The aim was to evaluate the effect of a combination of nutrients of different origins and inhibitors of grampositive bacteria on the development of Salmonella serotypes. 52 Salmonella strains and a representation of other bacteria and yeasts were selected. The nutritional capacity of the composition was determined by spectrophotometric technique formulating variants with mixtures of nutritive bases, and recording the increase in biomass. Recovery capacity and inhibition of two experimental variants with different inhibitors were quantitatively tested. The productivity of the final formulation was compared with a chromogenic medium (Oxoid, England). Salmonella showed abundant growth in the variants made with different nutrient combinations. Both experimental formulations showed their ability to recover microorganisms of interest. The final composition showed productivity values higher than 0.80 in both variants. The mixture of nutrient bases and bile salts as an inhibitor of growth of grampositive bacteria was an effective combination, capable of stimulating the growth of Salmonella genus when these bacteria are found at low concentration.

Cultivo in vitro de larvas L3 de nematodos obtenidas del caracol gigante africano Lissachatina fulica (Mollusca: Gastropoda) en Santa Fe de Antioquia / In vitro culture of L3 larvae of nematodes obtained from the African giant snail Lissachatina fulica (Mollusca: Gastropoda) in Santa Fe de Antioquia

Introducción. Más de 170 municipios colombianos están invadidos por Lissachatina fulica, caracol africano que puede portar larvas de nematodos de interés en salud humana y veterinaria. Los parásitos entran al caracol huésped intermediario en el estadio de larva L1, y allí cambian a L2 y L3, formas estas capaces de infectar a vertebrados. Objetivo. Estandarizar el cultivo in vitro de las L3 portadas por especímenes de L. fulica recolectados en Santa Fe de Antioquia. Materiales y métodos. Entre julio y noviembre de 2014 se recolectaron 10 caracoles, se sacrificaron y se digirieron con ácido clorhídrico al 0,7 %. Las larvas se recuperaron mediante la técnica de Baermann; se cultivaron 36 días en los medios Schneider, mínimo esencial de Eagle modificado por Dulbecco (Dulbecco's Modified Eagles Minimal Essential Medium, DMEM), y Roswell Park Memorial Institute (RPMI), con suero fetal bovino (SFB) al 20 % y sin este, y agua destilada con SFB al 20 %. Los medios de cultivo se cambiaron cada 36 horas. Las larvas se midieron con el microscopio utilizando reglilla ocular, y se evaluaron la supervivencia, la longitud y el ancho. Se calcularon datos estadísticos de resumen y se hicieron gráficos de cajas y bigotes, así como la prueba t de Student. El nivel de significación (p) se estableció como menor de 0,05. Resultados. El 50 % de las larvas sobrevivió, 85 % en DMEM con SFB al 20 %, el 70 % con RPMI más SFB al 20 %, el 60 % en RPMI, el 50 % en Schneider más SFB al 20 %, el 45 % en Schneider y el 40 % en DMEM. El control sobrevivió diez días. Hubo diferencias significativas entre la longitud inicial promedio de las larvas y la longitud final promedio en los medios con suplementos: inicial, 645,83 µm; final en DMEM más SFB al 20 %, 732,65 µm (p<0,001); en RPMI más SFB al 20 %, 718,79 µm (p<0,001), y en Schneider más SFB al 20 %, 696,12 µm (p<0,01). No hubo diferencias significativas entre la anchura inicial promedio, de 24,99 µm, y la final. Conclusiones. El mejor medio para cultivar las L3 de L. fulica fue el DMEM más SFB al 20 %. En la evaluación del crecimiento larval, la longitud fue más informativa que la anchura. Las larvas estudiadas no correspondieron a Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis ni Aelurostrongylus abstrusus.

Introduction: Over 170 municipalities in Colombia have been invaded by Lissachatina fulica, an African snail that can carry larvae of nematodes of interest in human and veterinary health. Nematodes enter the host snail as larvae L1 and then change to L2 and L3, the infectious form for vertebrates. Objective: To standardize culture in vitro of L3 carried by L. fulica from Santa Fe de Antioquia. Materials and methods: Between July and November, 2014, 10 snails were collected, killed, and conserved with HCl 0.7%. Larvae were recovered using the Baermann technique and cultured for 36 days in Schneider, DMEM and RPMI media, with and without SFB 20% and distilled water with SFB 20%. Replacements were made every 36 hours; larvae were measured with an ocular micrometer on a microscope. Summary statistics were estimated; box and whisker plots were made; the t Student test was performed in SPSS 18™. A p-value below 0.05 was assumed as significant. Results: Fifty per cent of the larvae survived. The highest survival and growth was 85% in supplemented DMEM. The final average length of larvae in supplemented media exceeded the initial one. There were significant differences between the average length of larvae cultured in supplemented media and the initial length. The initial width of larvae did not change. Conclusions: The best medium for the culture of L3 larvae was supplemented DMEM. The length provided more information than the width for the larval growth evaluation. The larvae studied did not correspond to Angiostrongylus cantonensis, A. costaricensis or Aelurostrongylus abstrusus.

Comparación de las características poblacionales de Lemna minuta (ARACEAE: LEMNOIDEAE) en tres medios de cultivo / Comparison of the populational characteristics of Lemna minuta (ARACEAE: LEMNOIDEAE) in three culture media

RESUMEN Las investigaciones en macrófitas acuáticas neotropicales son escasas, principalmente en Colombia comparadas con países como Brasil, aunque se consideran comunidades apropiadas en diversas aplicaciones por su gran capacidad reproductiva y alta sensibilidad a condiciones cambiantes del ambiente. Se propuso aclimatar y cultivar un clon de Lemna minuta, lenteja de agua flotante de amplia distribución en Colombia y América. Sus frondas hijas se mantuvieron dos meses en el medio de cultivo APHA y posteriormente se comparó su propagación en tres medios de cultivo: Hoagland's E+, APHA y AAP20x. Se analizaron variables de crecimiento poblacional como tasa de crecimiento, mortalidad, tiempo de duplicación y tiempo de vida. Adicionalmente, se evaluó la eficiencia del método de limpieza de frondas propuesto por Acreman para obtener cultivos axénicos. Los resultados indicaron que el medio Hoagland's E+ (sin compuestos orgánicos) es el más adecuado para el crecimiento de las frondas en condiciones de laboratorio, debido a su mayor tasa de producción de frondas (0,16 frondas-d"1) y tiempo de vida (13,8 días), con menor mortalidad (0,11 frondas-d"1) y tiempo de duplicación (4,61 días). Conocer los parámetros de crecimiento poblacional y las condiciones de cultivo de L. minuta permiten proponerla como una macrófita relevante y candidata para diversos bioensayos de calidad de agua.

ABSTRACT Although neotropical macrophytes are considered appropriate for diverse applications due to their great reproductive capacity and high sensitivity to changing environmental conditions, research on these plants is currently scarce, especially in Colombia when compared to countries such as Brazil. The current research work intended to acclimatize and cultivate a clone of the duckweed Lemna minuta, which is widely distributed in Colombia and America. After keeping daughter fronds of this species for two months in APHA culture medium, their propagation was compared in three culture media: Hoagland's E+, APHA and AAP20x. Population growth variables such as growth rate, mortality, doubling time and life span. Additionally, the efficiency of the frond cleaning method proposed by Acreman to obtain axenic cultures was evaluated. The results indicated that Hoagland's E+ medium (without organic compounds) is the most suitable one when it comes to frond growing under laboratory conditions, due to its associated higher frond production rate (0.16 fronds-d-1) and life span (13.8 d), as well as lower mortality (0.11 fronds-d-1) and doubling time (4.61 d). Knowing the population growth and cultivation conditions of L. minuta allows proposing it as a relevant macrophyte and candidate for various water quality bioassays.

Identificación de micobacterias en medio sólido mediante microscopía de fase invertida y tinción Ziehl-Neelsen / Mycobacteria identification in solid culture by inverted phase microscopy and ziehl-neelsen stain

RESUMEN Con el objetivo de identificar diferencias morfológicas en colonias de diferentes especies de micobacterias mediante microscopía de fase invertida, se sembraron en medio sólido 7H11, nueve especies de micobacterias patógenas de alta prevalencia y se observaron hasta por 21 días. Adicionalmente se realizaron coloraciones Ziehl-Neelsen (ZN) para cada una de ellas. No se identificó variaciones morfológicas entre las especies cultivadas, sin embargo, se observó que todas fueron capaces de formar cordones en su etapa temprana de crecimiento, siendo corroborado por coloración ZN en Mycobacterium tuberculosis. Asimismo, se determinó ciertas características microbiológicas como tiempo mínimo y la temperatura de crecimiento, y características bacilares basadas en la tinción ZN para cada especie estudiada. Estos hallazgos son importantes para la identificación del agente etiológico y podrían servir de base para estudios posteriores sobre la identificación de las biomoléculas involucradas en la agregación celular de cada micobacteria.

ABSTRACT With the aim of identifying morphological differences in colonies of different species of mycobacteria by means of inverted phase microscopy, nine species of high-prevalence pathogenic mycobacteria were seeded in 7H11 solid medium and were observed for up to 21 days. Additionally, Ziehl-Neelsen (ZN) stains were carried out for each one of them. No morphological variations were identified among the species grown on solid medium; however, it was identified that all are able to form cords in solid medium in an early stage of growth, being corroborated by the Ziehl-Neelsen stain in Mycobacterium tuberculosis. so techniques based on detecting M. tuberculosis depending on the identification of the cords should be taken with caution so as not to generate a bad diagnosis, so microbiological characteristics could also be established as a minimum time to detect growth, temperature of growth and bacillary characteristics based on the Ziehl-Neelsen stain for each species studied.

Detección de la colonización asintomática en orofaringe por Streptococcus pyogenes mediante dos métodos diagnósticos / Detection of asymptomatic oropharyngeal carriage of Streptococcus pyogenes using two diagnostic methods

Resumen Introducción. La Streptococcus pyogenes causa infecciones supurativas en la piel, en las mucosas y de carácter sistémico. Su detección oportuna es importante para evitar el desarrollo de complicaciones no supurativas. Además, el estado de portador puede ser una fuente potencial de autoinoculación o de brotes infecciosos. Objetivo. Determinar la presencia de estudiantes de medicina en estado de portador de S. pyogenes mediante dos métodos diagnósticos. Materiales y métodos. Se realizó un estudio de corte transversal con muestreo por conveniencia donde se analizaron muestras de orofaringe por inmunoensayo enzimático StrepA y cultivo bacteriano en agar base sangre de cordero al 5% más pruebas diferenciales con el objetivo de detectar la presencia de S. pyogenes. Resultados. De 77 muestras incluidas en el análisis, 3 (3.9%) fueron positivas por el cultivo microbiológico para S. pyogenes y ninguna por el método StrepA. Conclusión. El hallazgo de la bacteria S. pyogenes entre los estudiantes de medicina asintomáticos alerta de un potencial infeccioso. En la comparación de los métodos diagnósticos para su detección, los hallazgos validan el uso del cultivo sobre el del StrepA, en el caso de que se desee estimar la presencia de portadores de dicho agente.

Abstract Introduction: Streptococcus pyogenes causes suppurative skin, mucosal and systemic infections. Timely detection is important to avoid the development of nonsuppurative complications. In addition, carrier status can be a potential source of autoinoculation or infectious outbreaks. Objective: To establish the status as S. pyogenes carriers of medical students using two diagnostic methods. Materials and methods: A cross-sectional study was carried out with convenience sampling, in which samples from the oropharynx were analyzed by enzyme Strep-A immunoassay and bacterial culture on sheep blood agar at 5%, plus differential tests to detect the presence of S. pyogenes. Results: Out of 77 samples included in the analysis, 3 (3.9%) were positive for the microbiological culture for S. pyogenes and none for the Strep-A method. Conclusion: Finding the bacterium S. pyogenes among asymptomatic medical students is a warning sign of a potential infection. The comparison of the diagnostic methods for detection showed that the findings validate the use of the culture over Strep-A, if estimating the presence of carriers of said agent is desired.

Influencia de la procedencia de los componentes del medio de cultivo en la calidad de los ensayos microbiológicos para la determinación de bacteriófagos / Influence of the origin of the components of the culture medium on the quality of the microbiological assays for the determination of bacteriophages

La contaminación por virus bacterianos es uno de los problemas más difíciles de evaluar en la industria biotecnológica moderna, sobre todo en las producciones de proteínas que están basadas en cepas recombinante de Escherichia coli. Para certificar que un banco de cepas está libre de bacteriófagos el método más recomendado sigue siendo la inducción de la fase del ciclo lítico sobre placas con medios semisólidos. En este trabajo nos propusimos evaluar medios de cultivos elaborados con bases de diferentes casas comerciales para la detección de bacteriófagos contaminantes. Para ello utilizamos un aislado de bacteriófago ambiental y la cepa sensible LE 392 y bases de las firmas OXOID, BioCen y Biolife. Después de estandarizar la metodología de ensayo se evaluó la habilidad de una preparación concentrada del aislado ambiental de formar placas de lisis en los medios elaborados con reactivos de las tres casas comerciales. La mayor cantidad de placas de lisis se obtuvo cuando se emplearon las bases provenientes del Centro Nacional de Biopreparados, el medio donde menos placas de lisis observamos fue empleando bases proveniente de la Casa comercial Biolife con dos órdenes de magnitud menos. El medio preparado con bases provenientes de la casa comercial OXOID fue el que mostró mejor consistencia entre lotes(AU)

Contamination by bacterial viruses is one of the most difficult problems to evaluate in the modern biotechnology industry, especially in the productions of recombinant proteins that are based on Escherichia coli strains. To certify that a strain bank is free of bacteriophage, the most recommended method is still the induction of the lytic cycle phase on plates with semisolid media. In this work we set out to evaluate means of cultures made with bases of different commercial houses for the detection of contaminating bacteriophages. For this purpose we used an environmental bacteriophage isolate and the LE392 sensitive strain and bases of the firms OXOID, BioCen and Biolife. After standardization of the test methodology, the ability of a concentrated preparation of the environmental isolate to form lysis plates in the media made with reagents from the three commercial houses was evaluated. The largest number of lysis plates was obtained when using the bases from the National Center of Biopreparates, the means where less lysis plates were observed was using bases from the Biolife Commercial House with two orders of magnitude less. The medium prepared with bases from the commercial house OXOID was the one that showed better lot to lot consistency(AU)

Evaluación de las condiciones de crecimiento celular para la producción de astaxantina a patir de la microalga Haematococcus pluvialis / Evaluation of Cell Growth Conditions for the Astaxanthin Production as of Haematococcus pluvialis Microalgae

Resumen En la actualidad la astaxantina de origen natural es uno de los pigmentos carotenoides con importantes aplicaciones en la industria alimenticia, farmacéutica y cosmética, debido a sus grandes propiedades dentro de las que se destaca su gran poder antioxidante, efecto preventivo del cáncer, incremento de la respuesta inmune, inhibición de los radicales libres entre muchas otras. Haematococcus pluvialis es una microalga verde de agua dulce y es una de las fuentes naturales con mayor producción de astaxantina ya que es capaz de acumular hasta un 3% de astaxantina en peso seco. El objetivo del presente trabajo fue determinar el medio de cultivo y las condiciones óptimas para el crecimiento y la producción de astaxantina a partir de Haematococcus pluvialis. La influencia de diferentes factores como el pH, temperatura, agitación, aireación CO2 e iluminación favorecen el crecimiento celular, al darle un ambiente óptimo a la microalga. Para determinar las condiciones nutricionales óptimas, se evaluó el efecto de diferentes medios de cultivo (BBM, OHM, RM) en Birreactores de 500mL con 350mL de medio y 1x104cel/ml de inóculo en fase exponencial, las condiciones de cultivo empleadas fueron: pH. 6.7 a 7, CO2 al 5%, fotoperiodo de 16 horas luz 8 oscuridad, irradianza 70μE/m2s; Los resultados mostraron que el mayor crecimiento o producción celular se obtuvo en el medio RM con 7,5 x 105 cel/ml en el día 36, y la mayor producción de astaxantina se obtuvo en el medio RM con una concentración de 8.3 μg/ml en el tratamiento 4.

Abstract Currently astaxanthin of natural origin is one of the carotenoids with important applications in the food, pharmaceutical and cosmetics, due to their large properties within its powerful antioxidant, cancer preventive effect, increase the immune response, inhibiting free radicals among many others. Haematococcus pluvialis is a freshwater green microalgae and is one of the largest natural sources of astaxanthin production as it is able to accumulate up to 3% astaxanthin by dry weight. The aim of this study was to determine the culture medium and the optimal conditions for growth and production of astaxanthin from Haematococcus pluvialis. The influence of different factors such as pH, temperature, agitation, aeration and lighting, CO2, promote cell growth, by giving an optimal environment to microalgae. To determine the optimal nutritional conditions for cell growth the effect of different culture media (BBM, OHM, RM) in bioreactors of 500 ml with 350mL of medium and 1x104 cells/ml inoculum was evaluated in exponential phase, the culture conditions employed they were: pH. 6.7 to 7, 5% CO2, 16 hours photoperiod Light 8 dark, irradiance 70 μE / m2s; The results showed that the highest growth and cell reproduction was obtained in the middle RM with 7.5 x 105 cells /ml on day 36, and increased production of astaxanthin was obtained in the middle RM with a concentration of 8.3 ug / ml in the treatment 4.

Una mirada rápida al control de calidad interno en el quehacer diario del laboratorio de microbiología / A quick look at internal quality control in the daily routine of the microbiology laboratory

Resumen: el laboratorio de microbiología es un sistema complejo que implica muchos pasos para cada actividad, requiere de diversas personas y cuyos resultados analíticos generados deben ser lo más exactos posible. De no ser así, las consecuencias se pueden volver muy significativas, entre ellas, la realización de procedimientos innecesarios al paciente, los retrasos en la obtención de un resultado correcto y la ejecución de pruebas diagnósticas adicionales que se podían evitar. Estas consecuencias incrementan los gastos, tanto en términos económicos como en tiempo y esfuerzos del personal. La mayoría de las técnicas analíticas implican diversos procedimientos que están sujetos a cierto grado de imprecisión y posibilidad de error. Por tal razón, es importante la realización de un control de calidad interno que asegure que los productos finales o valores analíticos, que son producidos por un laboratorio, sean lo suficientemente fiables y adecuados para la finalidad que persiguen. De esta manera, un laboratorio microbiológico debe evaluar y documentar el desempeño de todos los aspectos de sus procedimientos, que incluye la calidad de la muestra, la eficiencia de los reactivos y antisueros, las coloraciones, los medios de cultivo, el funcionamiento de instrumentos o equipos, las cepas de referencia y la verificación o validación de los resultados obtenidos. El objetivo de este manuscrito es presentar una revisión bibliográfica sobre algunos elementos del laboratorio de microbiología susceptibles de control de calidad interno, como parte integral del trabajo diario del personal que labora en este. (AU)

Abstract: The microbiology laboratory is a complex system, which involves many steps for each activity and different people, and where analytical results must be as accurate as possible. If the results are inaccurate, the consequences can be significant, including the performance of unnecessary procedures, delays in obtaining a proper result and implementation additional diagnostic tests that could be avoided. These consequences increase spending both economics terms as time and efforts of the staff. Most analytical techniques involve several procedures that are subject to some degree of imprecision and possibility of error. Therefore, it's important to apply an internal quality control that ensure that finished products or analytical values which are produced by a laboratory are sufficiently reliable and appropriate to the objective pursued. In this way, a microbiological laboratory must assess and document the performance of all aspects of its procedures that includes the quality of the sample, the efficiency of reagents and antisera, the staining, the culture media, the operation of instruments or equipment, the strains of reference, and the verification or validation of the results obtained. The aim of this manuscript is to present a literature review about some elements of microbiology laboratory that are susceptible of internal quality control, as an integral part of the daily work of the staff working in this one. (AU)

Diagnóstico de tuberculosis pulmonar en lavado broncoalveolar: desempeño de la PCR en comparación con las pruebas microbiológicas de rutina / Diagnosis of pulmonary tuberculosis in bronchoalveolar lavage: performance of PCR compared to routine microbiological tests

Introducción: en pacientes con alta sospecha clínica, alteraciones radiológicas y síntomas respiratorios compatibles con tuberculosis pulmonar se recomienda obtener muestras de lavado broncoalveolar para mejorar la sensibilidad diagnóstica de la prueba utilizada. Objetivo: describir el desempeño de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de Mycobacterium tuberculosis en muestras de lavado broncoalveolar, en casos sospechosos de tuberculosis pulmonar. Materiales y métodos: se realizó un estudio retrospectivo analítico de 611 muestras de lavado broncoalveolar, provenientes de 606 pacientes con sospecha de tuberculosis pulmonar, que asistieron al Hospital Pablo Tobón Uribe (Colombia) entre 2005 y 2015. La sensibilidad, especificidad y valores predictivos negativos y positivos de la reacción en cadena de la polimerasa se calcularon mediante comparación frente al cultivo (estándar de referencia). Resultados: del total de muestras analizadas el 4,9% fueron positivas para Mycobacterium tuberculosis por reacción en cadena de la polimerasa, y el 3,9% por cultivo. De las muestras positivas por reacción en cadena de la polimerasa el 80% (24/30) fueron positivas al cultivo. La sensibilidad, especificidad y valores predictivos negativos y positivos de la reacción en cadena de la polimerasa para Mycobacterium tuberculosis en muestras de lavado broncoalveolar fue de 100%, 99,0%, 100% y 80,0%, respectivamente. Conclusión: la reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Mycobacterium tuberculosis en lavados broncoalveolares es superior en tiempo, sensibilidad y especificidad que el extendido y el cultivo, por lo que, junto con los datos clínicos del paciente, es efectiva para hacer un rápido abordaje diagnóstico. (AU)

Introduction: in patients with a high clinical suspicion, radiological alterations and respiratory symptoms compatible with pulmonary tuberculosis it is recommended to obtain samples of bronchoalveolar lavage to improve the diagnostic sensitivity of the test used. Objective: To describe the performance of polymerase chain reaction (PCR) for Mycobacterium tuberculosis detection in bronchoalveolar lavage samples in suspected cases of pulmonary tuberculosis. Material and methods: A retrospective analytical study of 611 bronchoalveolar lavage samples from 606 patients with suspected pulmonary tuberculosis who attended in Hospital Pablo Tobon Uribe (Colombia) between 2005 and 2015 was performed. Sensitivity, specificity and positive and negative predictive values of polymerase chain reaction were calculated by comparison with the culture (gold standard). Results: From the total of analyzed samples 4.9% were positive for Mycobacterium tuberculosis by polymerase chain reaction positive and 3.9% by culture. Of the polymerase chain reaction positive samples, 80% (24/30) were positive on the culture. The sensitivity, specificity, negative and positive predictive values of polymerase chain reaction for Mycobacterium tuberculosis in bronchoalveolar lavage samples were 100%, 99.0%, 100%, 80.0%, respectively. Conclusion: Polymerase chain reaction for the detection of Mycobacterium tuberculosis in bronchoalveolar lavage samples is superior in time, sensitivity and specificity, than the smear and culture, proving to be effective, together with the clinical data, to make a rapid diagnostic approach. (AU)

Estrategias para disminuir la necrosis apical en la multiplicación y el enraizamiento in vitro del Pistacho / Strategies to reduce the apical necrosis in vitro multiplication and rooting of Pistachio

El pistacho (Pistacia sp.) es uno de los frutales menos explotados, entre las principales causas está el elevado costo del material vegetal por las dificultades de propagación de la especie. La propagación in vitro ofrece un gran potencial para la industria de esta especie por la multiplicación a gran escala de clones seleccionados. El objetivo del presente trabajo fue controlar la necrosis apical de los brotes en la propagación in vitro del pistacho. A partir de brotes jóvenes de plantas de esta especie mantenidas en casas de cultivo, se procedió a su desinfección con hipoclorito de sodio al 1% durante diferentes tiempos. Las yemas apicales y axilares se establecieron en el medio de cultivo Murashige & Skoog (1962) modificado y enriquecido con 1 mg/L de Metatopolina. Se evaluaron diferentes tipos de frascos, número y tipo de explantes y formulaciones de medios de cultivo durante dos subcultivos de multiplicación y en el enraizamiento. El frasco de cristal de 200 ml de capacidad, la línea prolifera y el medio de cultivo DKW lograron los valores más bajo de necrosis apical. En la fase de multiplicación se presentaron valores bajo en todos los tratamientos ensayados sin diferencia estadísticas entre ellos en comparación con el enraizamiento donde la necrosis apical alcanzó valores superiores. El medio DKW y las líneas prolíferas lograron los menores valores. El medio de cultivo MS modificado, favoreció el número de segmentos enraizados y el DKW (Driver & Kuniyuki, 1984) el número de segmentos que brotaron, presentando este último menor incidencia de necrosis apical.

The pistachio (Pistacia sp.) is one of the least exploited fruit among the main causes is the high cost of plant material by the difficulties of propagation of the species. The propagation in vitro offers great potential for the industry of this species by multiplication scale of selected clones. The aim of this study was to control the apical necrosis of outbreaks in the in vitro propagation Pistachio. From young shoots of plants of this species kept in growing houses, proceeded to disinfection with sodium hypochlorite 1% for different times. The apical and axillary buds were established in the culture medium Murashige and Skoog (1962) modified and supplemented with 1 mg/L Metatopolina. Different types of bottles, number and type of explants and culture media formulations for two subcultures multiplication and rooting were evaluated. Glass flask of 200 ml capacity, and line proliferates DKW medium achieved the lowest values apical necrosis. In the multiplication phase values were low in all treatments tested no statistical difference between them compared to rooting where apical necrosis reached higher values. The average DKW and prolific lines obtained lower values. MS medium modified crop, favored the number of segments rooted and DKW (Driver and Kuniyuki, 1984) the number of segments that sprouted, the latter having lower incidence of apical necrosis.